琼脂糖凝胶电泳(怎样做RNA的琼脂糖凝胶电泳)

做RNA的琼脂糖凝胶电泳具体操作和步骤如下 1.去离子甲酰胺。v电泳槽清洗:去污剂洗干净(一般浸泡过夜)水冲洗乙醇干燥-3%H2O2灌满室 温放置10分钟0.1%DEPC水冲洗2.将制胶用具用70%乙醇中洗一遍，晾干备用3.配制晾脂糖凝胶。称0.5g琼脂糖，置干净的100ml锥形瓶中， 加入40ml蒸馏水，微波炉内加热使称脂糖彻底溶化均匀。待胶凉至60-70 ℃，依次向其中加入9ml甲醛、5ml 10x MOPS缓冲液和0.5μl溴化乙锭，混合均匀。灌制琼脂糖凝胶。4.取DEPC处理过的500μl小离心管，依次加入如下试剂10x MOPS爱冲液2μl,甲醛3.5μl,甲酰胺(去离子) 10μl, RNA样品4.5μl,混匀；上样；电泳:电泳槽内加入1XMOPS缓冲液，于7.5V/ml 的电压下电泳；电泳结束后，在紫外灯下检查结果。扩展资料琼脂糖凝胶电泳的分析原理与其他支持物电泳最主要区别是它兼有“分子筛”和“电泳”的双重作用。琼脂糖凝胶具有网络结构，物质分子通过时会受到阻力，大分子物质在涌动时受到的阻力大，在凝胶电泳中，带电颗粒的分离不仅取决于净电荷的性质和数量，而且还取决于分子大小，这就大大提高了分辨能力。但由于其孔径相比于蛋白质太大，对大多数蛋白质来说其分子筛效应微不足道，现广泛应用于核酸的研究中。蛋白质和核酸会根据pH不同带有不同电荷，在电场中受力大小不同，跑的速度不同，根据这个原理可将其分开。电泳缓冲液的pH在6~9之间，离子强度0.02~0.05为最适。常用1%的琼脂糖作为电泳支持物。琼脂糖凝胶约可区分相差100bp的DNA片段，其分辨率虽比聚丙烯酰胺凝胶低，但它制备容易，分离范围广。普通琼脂糖凝胶分离DNA的范围为0.2-20kb，利用脉冲电泳，可分离高达10^7bp的DNA片段。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，它们能以同样的速率向正极方向移动。